Sistemul RSLC nano

 Sistemul RSLC nano face parte din portofoliul Ultimate 3000 fiind destinat in principal analizei de biomolecule in proteomica. 

Studiul pe scara larga al proteinelor, respectiv investigarea structurii si functiilor proteinelor, al modificarilor translationale, purificari, etc., lanseaza provocari multiple pentru analisti prin:

• inalta complexitate a probelor

• variatii mari de concentratii in cadrul aceleiasi probe

• probe limitate cantitativ

Solutia o reprezinta tehnicile de separare nano cuplate cu spectrometria de masa care asigura sensibilitate ridicata, eficienta crescuta in separare si detectie care sa ofere informatii structurale complete. RSLC nano System este util laboratoarelor unde performanta extrema si versatilitatea (nano, cap, micro) sunt critice.

Caracteristicile sistemului RSLCnano:

• Presiune maxima de 800 bar si debite cuprinse între 20 nL/min si 50 μL/min pentru o versatilitate totala a aplicatiilor

• Debit direct continuu (fara divizarea debitului) asigurat de o pompa cu gradient binar cu amestecare la presiune inalta, pentru separare, si o pompa cu gradient ternar la presiune joasa, pentru incarcarea probei si separari 2D

• Permite injectie directa, MUDPit, pre-concentrari si fluxuri complexe de pregatire a probelor cu pana la doua valve usor de instalat

• Permite aplicatii multidimensionale 2D-LC si tandem nano LC cu ajutorul pompei HPG nano, folosita ca modul separat in combinatie cu sistemul de pompe integrat

• Achizitia de date cu viteze de pana la 200 Hz

• Domeniu larg de aplicabilitate: nano, capilar, micro sau U-HPLC

• ØSistemul este ideal pentru cuplare MS, atat cu interfata ESI cat si MALDI

• Sistemele nano RSLC sunt oferite cu conectoare de tip nanoViper ce asigura etanseitatea conexiunilor cu volum mort zero, rezistente pana la 1000 bari, usor de folosit si compatibile cu orice valva si coloana. 

Modulele sistemului UltiMate 3000 RSLCnano includ:

Pompe

Pompele sistemului, respectiv pompa binara RS pentru debit nano/capilar si pompa ternara de incarcare, sunt integrate intr-un singur modul. 

Pompa HPG Nano prezinta urmatoarele caracteristici:

• Gradient binar, amestecare la presiune inalta

• Doua pistoane in serie pentru fiecare canal

• Presiune maxima 800 bari

• 20 nl/min – 50 µl/min. Selectia debitului se face cu restrictoare de debit pentru diferite domenii de lucru (NANO 50-1000 nL/min /CAPILAR 0,5-10 µL/min/MICRO 2,5-50 µL/min)

• 25 nL volum mort total

Pompa LPG Micro, folosita pentru incarcarea probei si experimente 2D-LC, se caracterizeaza prin:

• Gradient ternar cu amestecare la presiune joasa

• Presiune maxima 500 bari

• 10 µl/min – 2500 µl/min

Autosampler

Autosampler (T)PLRS caracterizat de:

• Injectie de tip pulled-loop

• Rezistent la presiuni  >900 bari

• Cu sau fara racirea probelor

• Domeniul volumului de injectie: 10 nL–125 μL

• Optiune de colectare de micro fractii

Compartiment coloane

Termostatul coloanelor prezinta urmatoarele caracteristici principale:

• Pana la 2 valve „snap-in” cu dispersie scazuta

• Pana la 3 coloane, max. 100 cm lungime

• Valve rezistente pana la 900 bari

• Domeniul de termostatare: ambiental +10°C pana la 75°C

Detectori

• Detectia UV cu detectorul VWD-3400RS cu celule in flux specifice pentru nano-, capilar- si micro-LC ofera avantaje semnificative in nano LC-MS.

In scopul cresterii sensibilitatii si a volumului de informatii, spectrometria de masa este metoda de detectie preferata pentru LC nano si capilar:

• Analizoare triplu cuadrupol, trape ionice lineare, sisteme hibride Orbitrap, cu interfata ESI sau MALDI

• MALDI MS este realizat prin spotter-ul Dionex Probot MALDI care datorita preciziei si flexibilitatii reprezinta interfata ideala nano-LC/MALDI-MS, insumand puterea de separare si inalta sensibilitate date de nano-LC cu inalta rezolutie data de MALDI-MS. Sistemul robotic asigura depunerea probelor precum si colectarea on-line de nL- si µL- fractii ce elueaza din sistemul LC nano si capilar pe diferite tipuri de matrici.

  Coloane

In diferitele aplicatii de separare a biomoleculelor, sunt posibile mai multe tehnici HPLC in functie de mecanismul separarii, respectiv: 

• Cromatografia in faza inversa RP

• Cromatografia de schimb ionic IEX

• Cromatografia de afinitate

• Cromatografia de interactie hidrofoba HIC

• Combinatii ale acestora (RP, IEX, HILIC)

Pe langa fazele stationare mentionate, Thermo Scientific a dezvoltat o gama extinsa de coloane dedicate aplicatiilor RSLC nano:

• Cartografiere peptide cu rezolutie inalta -  coloanele Acclaim™ PepMap™. Cu o lungime de max 50 cm si particule de 2 μm, aceste coloane valorifica deplin avantajele presiunii de 800 bari a sistemului UltiMate 3000 RSLCnano.

• Separare proteine si peptide in faza inversa -  coloanele monolit PepSwift™ disponibile pana la 25 cm lungime; cu fitting-uri nanoViper, patru coloane pot fi usor conectate pentru a obtine puterea de separare a unei coloane monolit de 1 metru.